Molekulárna diagnóza zodpovedá súboru molekulárnych techník, ktorých cieľom je identifikovať zmeny v DNA, ktoré môžu napríklad naznačovať genetické choroby alebo rakovinu. Navyše, molekulárne techniky sa široko používajú na identifikáciu a potvrdenie infekčných chorôb, pretože predstavujú rýchlejšiu a presnejšiu diagnostickú metódu.
Molekulárna diagnóza je drahá, a preto ju často nevyžadujú lekári, ale poskytuje presné výsledky týkajúce sa prítomnosti zmeny, spôsobu, akým môže zasahovať do fungovania organizmu a reakcie pacienta na túto chorobu. liečbu.
Čo je to pre
Molekulárnu diagnostiku je možné vykonať s niekoľkými cieľmi, medzi ktoré patria:
- Identifikácia mutácií súvisiacich s leukémiou, ako je napríklad identifikácia translokácie BCR-ABL, ktorá je charakteristická pre chronickú myeloidnú leukémiu (CML);
- Mutácie charakteristické pre hematologické choroby, ako napríklad dedičná hemochromatóza, polycytémia vera, esenciálna trombocytémia a trombofilia, napríklad - pochopiť trombofíliu a spôsob liečby;
- Molekulárne zmeny, ktoré naznačujú výskyt rakoviny, ako napríklad rakoviny kolorekta, pľúc, prsníka a mozgu;
- Diagnostika infekčných ochorení, ako je hepatitída, uretritída, toxoplazmóza, leishmanióza atď., Okrem identifikácie vírusu HPV .
Molekulárna diagnostika napriek tomu, že je v porovnaní s inými diagnostickými technikami považovaná za nákladnú, je presnejšia, pretože je schopná informovať o zmenách súvisiacich s určitou chorobou a stupňom vplyvu tejto zmeny v organizme, čím pomáha liečbe osoby.
Okrem toho, že sa používajú na diagnostiku rôznych ochorení, molekulárne techniky sa používajú aj na hodnotenie reakcie na liečbu, najmä u ľudí s rakovinou, ktoré sú jednou z najefektívnejších metód na indikáciu vývoja ochorenia a relapsu.
Ako sa to deje
Molekulárna diagnóza sa môže vykonať ľubovoľnou vzorkou a lekár sa vyzýva, aby poskytol informácie o stave pacienta, ktorým môže byť moč, sliny alebo väčšinou krv. Nie je potrebné rýchlo alebo inú prípravu na vyšetrenie.
Vzorka sa zozbiera a odošle laboratóriu spolu so stanoviskom lekára, ktorý informuje o skúške alebo type výskumu, ktorý by sa mal vykonať. Vykonaná molekulárna technika závisí od požadovanej skúšky a zahŕňa sériu presných postupov, ktorých konečným cieľom je zistiť prítomnosť alebo neprítomnosť zmien požadovaných lekárom.
Zvyčajne sa používa iba malé množstvo vzorky, zvyšok sa skladuje tak, že v prípade potreby sa test opakuje.
Pozrite sa, aké sú hlavné molekulárne techniky
PCR
PCR, krátka pre polymerázovú reťazovú reakciu, je molekulárna technika, ktorá pozostáva z amplifikácie fragmentu genetického materiálu, či už DNA alebo RNA, s cieľom identifikovať mutácie a tým pomôcť pri diagnostike ochorení.
Táto technika sa vyrába extrakciou a čistením genetického materiálu, ktorý sa potom umiestni do zmesi, v ktorej jedna zo zložiek je reštrikčný enzým, ktorý sa líši podľa požadovaného vyšetrenia a ktorého funkciou je rezanie materiálu na fragmenty identifikovať možnú genetickú zmenu. Zmes je umiestnená v termocykleri, čo je zariadenie, ktoré pôsobí cez teplotné rozdiely, ktoré indikuje odborník podľa skúšky, a týmto spôsobom umožňuje amplifikáciu genetického fragmentu. V prípade bežnej PCR sa po amplifikácii produkt PCR podrobí elektroforéze, čo je molekulárna technika založená na hmotnosti a veľkosti fragmentov, tj podľa týchto charakteristík sa vytvorí vzor pásov, ktorých analýza sa vykonáva na základe pásma pozitívnej kontroly, to znamená v pásme, o ktorom je známe, že zodpovedá genetickej zmene.
PCR v reálnom čase, nazývaný tiež qPCR, je typ kvantitatívnej PCR, to znamená, že okrem identifikácie genetickej zmeny je schopný poskytnúť informácie o génovej expresii, teda o tom, koľko je zmenený gén exprimovaný v organizme, a preto sa môže použiť na diagnostiku a monitorovanie liečby. PCR v reálnom čase nevyžaduje elektroforézu, celý proces amplifikácie a analýzy genetického materiálu sa vykonáva prístrojom a výsledok je interpretovaný vyškoleným odborníkom v oblasti zdravotníctva.
sekvenovania
Sekvenovanie je molekulárna technika, ktorá pozostáva z určenia nukleotidovej sekvencie DNA. Sekvenovanie sa uskutočňuje pri reakcii podobnej PCR, avšak v amplifikačnej zmesi sa pridajú nukleotidy modifikované pridaním fluórchrómov, pretože ako materiál sa amplifikuje, modifikované nukleotidy sa inkorporujú do DNA a generujú niekoľko fragmentov, ktoré zodpovedajú výsledku sekvencie.
Reakčný produkt sa umiestni do zariadenia nazývaného DNA sekvenátor, kde ako fragmenty narazia laserom prístroja, fluorochromy sú excitované, emitujú fluorescenciu, čo je indikované prístrojom pomocou píkov, každý zodpovedajúci vrchol k nukleotidu. Na konci reakcie zariadenie bude informovať DNA sekvenciu, čím pomôže lekárovi pri diagnostike genetických ochorení.
